期刊简介
本刊为华东地区优秀期刊。现已跻身全国高等中医药院校学报发行量的前列。近年来，凭着新世纪奋进的气势，大胆革新办刊理念，全国改版，调整栏目，获得业界及广大读者、作者的肯定。
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首页>江西中医药大学学报杂志
- 杂志名称：江西中医药大学学报杂志
- 主管单位：江西中医学院
- 主办单位：江西中医学院
- 国际刊号：1005-9431
- 国内刊号：36-1192/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：华东地区优秀期刊期刊收录：万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 维普收录(中), 上海图书馆馆藏
人XPD基因转染对人肝癌细胞的生物学影响
熊瑛；张吉翔；汤蕾
关键词：肝脏肿瘤, XPD HBx, CDK7
摘要：目的:XPD基因作为TFIIH因子中一员,在基因修复中发挥重大作用.本实验构建带有绿色荧光蛋白表达人野生型XPD基因重组质粒pEGFP-N2-XPD,并将其稳定转染至人肝癌细胞株Hep3B细胞,探讨XPD基因与HBx,Cdk7的相互作用,以及细胞周期和凋亡机制.方法:从人宫颈鳞癌上皮细胞株HeLa细胞克隆出人全长XPD cDNA,构建了pEGFP-N2-XPD重组体质粒,并将其稳定转染入Hep3B并筛选单克隆稳定转染重组质粒Hep3B细胞(Hep3B-pEGFP-N2/XPD)和稳定转染空载质粒Hep3B细胞(Hep3B-pEGFP-N2).利用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白表达,检测转染XPD基因后细胞内XPD,HBx,Cdk7的表达量变化,并检测细胞的增殖凋亡以及细胞周期变化.结果:(1)利用酶切和基因测序,成功构建了带有绿色荧光蛋白表达人野生型XPD基因重组质粒pEGFP-N2-XPD.(2)免疫荧光显微镜下,Hep3B-pEGFP-N2和Hep3B-pEGFP-N2-XPD细胞中可观察到绿色荧光蛋白表达.(3)RT-PCR检测:Hep3B-pEGFP-N2/XPD细胞与Hep3B和Hep3B-pEGFP-N2,两对照组相比,HBx mRNA表达明显降低(P＜0.001) XPD mRNA表达明显增高(P＜0.01) Cdk7 mRNA表达明显降低(P＜0.001).(4) MTT检测示Hep3B-pEGFP-N2/XPD与两对照相比,细胞增殖率减弱(P＜0.05).TUNEL检测示Hep3B-pEGFP-N2/XPD与两对照组比较,细胞凋亡明显增加(P＜0.01).流式细胞仪检测示Hep3B-pEGFP-N2/XPD进入S期出现障碍,停滞在G0 +G1期的细胞增多,细胞凋亡率逐渐增加.(5)Western blot检测Hep3B-pEGFP-N2/XPD细胞中XPD蛋白相对表达量均比两对照组高,Cdk7蛋白相对表达量均比两对照组低,差异有统计学意义(P＜0.001).结论:野生型XPD基因片段成功插入pEGFP-N2空载质粒中,将其稳定转染进人肝癌细胞株Hep3B细胞中,可以在转录和蛋白水平提高细胞XPD表达、降低细胞内HBx Cdk7表达.野生型XPD基因过渡表达可能抑制HBx Cdk7表达来改变细胞周期、抑制细胞生长、促使细胞凋亡.
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